Temas Selectos De La Ciencia Multidisciplinaria Biotecnología
La biotecnología es una ciencia multidisciplinaria que abarca diferentes técnicas y procesos, además por los grandes avances que ha tenido en los últimos años, la biología molecular se ha abierto la puerta a la obtención de nuevos organismos y a proteínas de diseño (CAR/PL, 2003). El desarrollo de nuevas herramientas moleculares, cuyo uso ha aumentado significativamente desde el descubrimiento de la PCR, la clonación, la secuenciación, la tecnología de detección por fluorescencia y la accesibilidad a una gran cantidad de información en la web (Palomino & González, 2014). Las bacterias y otros organismos contienen pequeñas moléculas de ADN circular extracromosómico de doble hebra, denominados “plásmidos” que contiene un gen que le proporciona resistencia a los antibióticos, además de que tienen sitios de multi clonación y sitio únicos de corte lo cual los convierte en los vectores de clonación más utilizados (Zapata, 2004).
Por el amplio conocimiento sobre la genética de las bacterias y lo anteriormente mencionado el principal modelo utilizado como sistema de expresión es Escherichia coli. Para explotar esta habilidad es necesario utilizar las técnicas adecuadas para obtener células competentes, la transformación es el primer paso a seguir, donde las moléculas recombinantes se introducen en E. coli (Galván-Cejudo, A. et al. s/f). La purificación del plásmido por medio del método miniprep, para aislar el ADN plasmídico del resto de los componentes celulares bacterianos por el método de lisis alcalina, donde se rompen las células mediante un choque alcalino (NaOH) y un detergente (dodecil sulfato de sodio; SDS) y se precipita el plásmido con etanol (Damián, P. et al. 2013).
Las endonucleasas son enzimas de restricción que cortan moléculas grandes de DNA en sitios específicos, generando fragmentos más pequeños de DNA con extremos “cohesivos” o rasurados y a la enzima ligasa que genera las uniones covalentes entre fragmentos de DNA (Zapata, 2004), esta información es de gran importancia en el proceso de producción de una escalera casera. Añadiendo la técnica de electroforesis que se basa en el estudio del movimiento de moléculas cargadas en un campo eléctrico y se emplea particularmente para la caracterización y análisis de polímeros biológicos cargados, como las proteínas y los ácidos nucleicos (Damián, P. et al. 2013), dentro de geles de agarosa o poliacrilamida en porcentajes de concentración para aumentar o disminuir la permeabilidad con la finalidad de separar las muestras por peso molecular.
Finalmente una técnica analítica de suma importancia utilizada para detectar la expresión de una proteína específica en un extracto crudo, mediante el uso de anticuerpos es el Western Blot (Advansta, 2009). Implica la separación por electroforesis por el sistema SDS-PAGE y una transferencia cuantitativa e irreversible a una membrana de nitrocelulosa de las proteínas de una mezcla compleja (lisado total celular). Los antígenos que se han transferido a la membrana son reconocidos por anticuerpos monoclonales o policlonales específicos de ellos (de la Fuente 2007).
